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企業動態

酶標儀在鈣離子通道檢測方面主要有兩種方式
發布時間:2016-10-27   點擊次數:1981次
酶標儀應用廣泛,酶標儀主要功能模塊熒光與化學發光模塊可實現對細胞中鈣離子通道的檢測。
生物膜離子通道是各種無機離子跨膜運動被動運輸的通路。生物膜上無機離子出入細胞的方式有被動運輸(順離子濃度)與主動運輸(逆離子濃度)。其中被動運輸的通路被稱為離子通道。Ca2+通道廣泛存在于各種生物組織的細胞膜中。藥物對Ca2+通道的作用可分為:①通道阻斷或抑制劑,可分為苯烷基胺類(如異博定、甲基異博定D600)、苯硫氮?類、雙氫吡啶類等類型。②通道激活劑,一些雙氫吡啶化合物如BayK8644等藥物可活化Ca2+通道。鈣離子通道定義:它是一種跨越細胞膜的結構,它嚴格控制著鈣離子進入細胞的過程。由于鈣離子信號與很多重要生理功能相關,例如心臟收縮、基因轉錄等,因此調節鈣離子進入細胞的反饋機制就至關重要。
酶標儀用于檢測鈣離子通路主要通過兩種方式:1,熒光法。化合物與細胞膜上離子通道結合后,改變離子通道狀態,通道打開,鈣離子進入細胞。進入細胞后與細胞內鈣離子熒光指示劑結合,發出熒光后酶標儀捕獲,熒光強度與進入細胞的鈣離子含量成正比。熒光指示劑多用FLuo3,Fluo3-AM是一種可以乙酰甲酯衍生物,可以穿透細胞膜進入細胞,進入細胞后被細胞內的酯酶剪切成FLuo3并滯留在細胞內,鈣離子進入細胞后與之結合,會發出較強的熒光。
2,發光法。水母發光蛋白復合物(Aequorin)由22kDa的水母蛋白(Apoaequorin protein)、分子氧和底物腔腸素組成。只有當鈣離子(Ca2+)與該復合物結合后,腔腸素才能被氧化生成高能量產物Coelenteramide,同時釋放出CO2和藍色熒光(——466 nm)。正是此Ca2+依賴性的反應過程(見圖1),使得腔腸素非常適用于監測活細胞內鈣離子水平。與常規的熒光鈣離子指示劑相比,其主要具有以下幾個優點,1)能檢測較大范圍的鈣濃度 – 從0.1 μM至 >100μM;2)樣品無自體熒光,背景熒光低于使用熒光鈣離子指示劑;雖然信號比使用熒光鈣離子指示劑弱,但是通過成像儀器可以得到更高的信噪比,因此具有更高的靈敏度。3)水母發光蛋白復合體能夠穩定維持在細胞內,使其能夠進行數小時至數天的鈣離子監測。

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